Foi fundado em 1893 por José Leite de Vasconcelos (linguista, filólogo, arqueólogo e etnógrafo português), e o seu acervo, alojado no Mosteiro dos Jerónimos, reúne as suas colecções iniciais, bem como as de Estácio da Veiga. A estas somaram-se muitas outras, caso das colecções de arqueologia da antiga Casa Real Portuguesa, ou das colecções de arqueologia do antigo Museu de Belas Artes. Outras chegaram aqui por doação ou legado de coleccionadores e amigos do museu, como Bustorff Silva, Luís Bramão, e Samuel Levy.
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